普通的X-射線法（鉬靶）僅能構(gòu)筑化合物的相對(duì)構(gòu)型，不能區(qū)分對(duì)應(yīng)異構(gòu)體。如果分子中含有重原子（一般原子序數(shù)大于16）或在分子中引入一個(gè)重原子，就可用X-射線來(lái)測(cè)定該重原子的手性分子絕對(duì)構(gòu)型。此外，通過(guò)引入另一個(gè)已知絕對(duì)構(gòu)型的手性分子也可獲得結(jié)構(gòu)的絕對(duì)構(gòu)型。隨著技術(shù)的發(fā)展，采用CuKa作為入射光源的X-射線單晶CCD衍射儀，對(duì)于測(cè)定相對(duì)分子量在1000以下、含C、H、N、O原子有機(jī)分子的絕對(duì)構(gòu)型已可實(shí)現(xiàn)了。

在單晶結(jié)構(gòu)分析中，目前國(guó)際公認(rèn)表征絕對(duì)構(gòu)型的參數(shù)稱(chēng)為Flack 參數(shù)，當(dāng)結(jié)構(gòu)分析進(jìn)入到最后的精修階段時(shí)，如果該參數(shù)等于或接近0，或其參數(shù)在± 0.3之內(nèi)，那么一般認(rèn)為絕對(duì)構(gòu)型就被確定了。

采用單晶X-衍射法樣品用量少、測(cè)定迅速、結(jié)果可靠直觀，可以作為最終的立體構(gòu)型的確定方法。但是由于測(cè)試的儀器價(jià)格昂貴，對(duì)單晶有嚴(yán)格要求，也限制了X-射線衍射法的應(yīng)用。